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家禽抗非洲猪瘟精制卵黄抗体冻干粉

2019/7/4 0:30:05发布123次查看
家禽抗非洲猪瘟精制卵黄抗体冻干粉
精制卵黄抗体冻干粉就是将精制抗体液体包被后,利用零下40℃低温真空捕水直接升华成可溶性粉。本品为淡黄色粉末。
规格:每桶10公斤,少量需要请提前说明。
成分:本国流行非洲猪瘟野毒株抗体。
含量:每克抗体冻干粉含非洲猪瘟抗体大于100纳克。
使用:可以添加到粉剂、散剂、中药提取物里等等,连用3天,15到20天用一次,严重地区一周用一次,一次2到3天。一般2小时内饮完。
原粉使用:以下为育肥猪、成年猪推荐使用标准,仔猪和保育猪可适当加量30~40%。
无病毒污染区使用预防:1克600公斤体重。
病毒污染区但本场检测不到病毒使用量:1克400公斤体重。
病毒污染区本场能够检测到病毒但猪不发病(潜伏期)的使用量:
1克300公斤体重。
病毒污染区本场能够检测到病毒并且猪有开始轻微发病的使用量:1克150到200公斤体重。再严重一些,病毒检测量在两个“+”号以上,可以增加到1克75公斤到100公斤体重。
病毒污染区本场猪只大量发病且死亡快速且大量死亡的,不吃不喝的,不建议治疗,如果兽医愿意试着治疗,可以选用注射用液体非洲猪瘟抗体。
保存:常温、荫凉、避光、通风处保存。有条件的地方冷藏更好。
               
有关问题
1、为什么要选用本国流行株?
答:非洲猪瘟具有众多的基因型,该病毒拥有重多的可变重组区,各病毒之间缺乏覆盖交叉,所以一定要选用当地流行株做抗体才有一定的效果。现在我们的毒株来自发病的俄罗斯,什么原因大家都知道,全国就是一个毒株,但是将来毒株有可能会变化,甚至再传来新的毒株,那时候更需要分离出流行毒株来做新的抗体,所以一定要使用当地流行毒株。
2、非洲猪瘟抗体的效果如何?
答:实验表明,vero细胞保护率50~95%,巨噬细胞保护率40~85%。
先用抗体,育肥猪后感染病毒半数感染量(tcid50)低于102,保护率为40~85%;先感染病毒,血液病毒had50低于103,保护率大约为30~70%。感染的病毒量越大,保护率越低,侵入免疫系统越快,则发病越快,保护率也随之下降,此时抗体需要量要大很多。非洲病毒在血液和组织中的病毒量大小能差几十倍到一百万倍,有的病猪身上病毒量可高达107tcid50或者109had。而且非洲猪瘟的危害不单单是病毒量的问题,它还有两个大问题,一是病毒攻击心、脑、肺、肝、肾和血管系统等核心器官,二是病毒引起的类似细胞因子风暴的自身的免疫的严重问题,大量的干扰素、肿瘤因子和白介素等过来攻击正常细胞并破坏正常细胞,造成严重的猪体损伤,这与病毒本身没有直接关系,而且后者在发病后期起的作用更大,但已经与病毒和抗体无关了,所以用抗体眼观症状并不能短时间减轻,尽管中和病毒后,过分的免疫反应有可能下降,但猪有可能等不到那个时候了。这才是非洲猪瘟的可怕之处。这也就是为什么非洲猪瘟要立足“预防”和早期治疗,而不能将重点放到如何把病重猪救过来的原因。
3、非洲猪瘟用抗体直接注射效果如何?
答:如果猪高烧不退不吃不喝,也只有液体抗体注射试试了。一般来说,猪的主器官没有被攻击,没有形成细胞因子风暴,就有戏,概率可能达到一半对一半,如果病毒量大且大量攻击主器官,同时还形成细胞因子风暴,那猪硬打过来的概率应该在30%以下,甚至一些兽医2018年秋冬就反映,无论打什么药,打一个死一个(注:那时还没有抗体制作出来)。
4、非洲猪瘟抗体能保100%吗?
答:不能,这个病毒会在我国长期存在,就目前的防控措施和技术来说,这个病毒来了就走不了了,流行株的抗体能有效减少病毒的复制和降低病毒滴度,增加猪的成活率,减少发病率,但它不会完全清除病毒。原因:一是外在的类似循环抗体不会将全身的病毒清除干净,病毒在细胞内和细胞在气管和肠道表面时,是不会被抗体接触到的,即循环抗体只能降低病毒滴度,但不能阻止病毒的侵入和排出,但能减少病毒在体内的复制并迟滞病毒的发作时间,只要不出现病毒大量突破免疫屏障,猪就不会大面积发病。二是非洲猪瘟的传播途径太多,一些猪场的饮水和污水中都能检测到活病毒,这些都不是抗体所能解决的。生物安全措施需要多方面配合,共同起作用。一些猪场的水源、粪水、猪舍中都能检出大量的非洲猪瘟病毒,一些运输车辆上也能检测到病毒,此外屠宰、加工、检疫以及泔水处理等过程都有大量的安全隐患,这些都不是单靠猪只饮饮抗体就能解决的。
5、为什么不建议对大面积快速死亡的群体进行治疗?
答:抗体粉主要用于无病毒的“预防”和低病毒感染时的压制和中和,病毒突破免疫屏障大量复制并攻击心、肺、肝、脾、肾、肠、骨等主器官时,高烧不退,它本身就不吃不喝了,只有注射这个途径了,所以得另外使用注射用非洲猪瘟抗体了,注射治疗方法也不是不能用,如果发病前期和中期不到晚期都有一定的希望,这主要考验兽医的诊断和判断水平。
这里面特别要注意的是,育肥猪和成年猪的死亡,一半或不到一半原因是因为病毒引起的,一半或一半以上的原因是猪自身的免疫反应引起的,一种情况是非洲猪瘟通过单核细胞和巨噬细胞等免疫细胞进行复制,整个免疫系统对它没有反应,当成了“自己人”,第二个原因是病毒攻击主器官,会直接造成器官衰竭和猪只死亡,第三个原因是细胞因子风暴,它比过敏反应还厉害。当然,作为兽医,试图对非洲猪瘟进行不计成本的治疗,以期取得一定的经验,以便对相关疾病的治疗界限进行探索,是应该得到鼓励的。有些是经验问题,有些是实践问题,必须在实践中培养相关技能。就象有的猪场发病后,1000头猪能死的只剩下十几头,而有的猪场发病后,同一个病毒,几个月就死了十几头,这些经验都需要反思相关经历和多方交流。
6、唾液中的病毒和血液中的病毒关系如何?精液中能检出病毒病吗?
答:病猪唾液中的病毒释放与猪血液中的呈平行关系,这个国外早已知道。唾液中的病毒几乎和血液中相等伴行。只不过采集唾液容易,采血难度大一点。但是实际上采血反而比唾液更准确一些,因为采唾液运作本身的误差大一些。病猪的唾液腺整天分泌带有大量病毒的唾液进入口腔和消化道,让猪整天无时无刻不在感染病毒,这是非洲猪瘟易于感染的一个重要原因,所以在这个意义上,来说让猪饮或吃一些抗体,在口腔和肠道及时中和病毒是非常关键的。
公猪精液中也能检测出病毒,输精会造成病毒感染母猪。精液中出现病毒应该稍晚于血液中。所以,输精前进行病毒检测也是十分必要的,输精感染是非洲猪瘟传播的一个重要途径,要尽量避免将阳性公猪精液输给未感染病毒的母猪。
7、非洲猪瘟胶体金快速诊断试纸的准确度如何?能不能完全替代pcr基因检测?
答:非洲猪瘟胶体金快速诊断试纸能够检测到一定量的非洲猪瘟病毒,如果把病猪身上的病毒分为四个等级(四个“+”号),试纸能比较容易检测到三个和四个“+”号的病毒,而两个“+”号的病毒眼观能看到,但已经不太明显了,一个“+”号的病毒一般不太好检测到。一般来说,患病猪如果在病毒血症时,能够检测到,如果病毒在单核细胞和巨噬细胞内而不在血清中时,试纸的灵敏度就明显下降了,当然,从技术角度考虑,也需要在病毒洗脱液上进行细胞裂解的配方调整。当然有的试纸根本检测不到明显的病毒,那属于质量问题,这种劣质产品或不合格产品很快就会被淘汰掉。
也就是说,如果一个猪场发生了非洲猪瘟,用试纸检测多检测几头猪,尽量减少失误,因为从病毒的复制曲线来看,假定猪只发病二十天时间,病毒大量存在于血清中的时间也就是四五天,那么试纸能明显眼观检测到的时间也只有四五天时间,其它时间检测不到,猪只一般很少一齐发病,前后有个时间差,所以一定要多检测几头,如果是阳性,那肯定的是发病了,如果没有检测到,也不一定没有感染,这时可以用pcr仪进行检测和确诊。试纸本身并不扩增病毒,而pcr仪则能成百万千万倍地扩增相关基因片段。
这里需要说明的一点,目前试纸的灵敏度也就是三个或四个“+”号,病毒在细胞中的量一般是一个或两个“+”号的问题,并不单是试纸的病毒洗脱液加不加细胞裂解液的问题。
需要说明的是,检测非洲猪瘟不是什么高科技,是县级及以上级兽医站的基本功能,作为一项技能,经过培训的普通兽医专业专科生本科生也能熟练掌握,没有必要将它神圣化,至于一些禁令,那是政治问题和行政问题,不是也不属于科学技术问题,不在一个层面上。
8、非洲猪瘟病毒有没有抗体依赖增强现象(ade),象猪蓝耳病那样,有低水平抗体存在时,病毒反而复制得更多了?
答:几十年来,尽管有极个别专家怀疑,但始终没有发现非洲猪瘟病毒有抗体依赖现象,非洲猪瘟病毒没有抗体fc、受体、配体和病毒组成复合物现象,所以不产生象艾滋病、登革热、和猪蓝耳病那样的抗体依赖增强现象。
9、非洲猪瘟为什么这么厉害?
答:非洲猪瘟的厉害,我们的感受和国外的感受不一致,国外主要是病毒不断变化,多个毒株反复流行,饶是西方集约化科技化程度高,防控难度也很大。我们的病毒只有一株,从俄罗斯直接拉了过来,8个月全国就被攻陷,我们遇到的主要问题是落后的集约化生产、笨拙的疫控架构和弄虚作假的应对模式。
非洲猪瘟厉害之处是它主要通过白细胞中的单核细胞和巨噬细胞复制,免疫系统因自身识别问题不能立即产生针对性免疫反应,等病毒传遍全身,攻陷主器官造成主器官衰竭和造成远端循环崩溃时,加上同时出现的细胞因子风暴,病猪几乎没有一点反抗就被“内外杀手”杀死了,大部分猪根本没有时间产生血清学免疫反应就阵亡了,所以常出现1000头猪只剩20来头有免疫反应的耐过猪,而且一部分康复猪仍携带着病毒。
当然不是所有猪场都死光了,就是在大片猪场“清圈”时,仍有个别猪场一两个月内只出现个别死亡,一直不出现大面积死亡,而且毒株没有弱化,还是同一个毒株,这里面有一些问题需要澄清,尽管非洲猪瘟病毒很厉害,但也要突破猪的各级屏障,首先它要侵入单核细胞,如果它进入不了淋巴结和扁桃体,说什么也没有用,二是要能大量复制并释放到血液中,第三还得进入重要器官和破坏血液循环,才能杀死猪,同时它还需要大量排出,如果不能大量排出并感染其它猪只,它也传不出去。非洲猪瘟病毒和其它烈性病毒一样,初始进入猪体复制的病毒,和大量传播时的病毒的表面抗原的空间结构有可能是不一样的,就象士兵刚好战场常忘上带枪一样,而经过猪体复制而排出的病毒明显都带了枪,这个过程尽管目前还不大清楚,但在一引起猪场中却能够很明显地看到这种现象,有的猪场,几千头猪,二十天就光了,有的猪场,同样的病毒,却没死几头猪,这里边除了非洲猪瘟病毒是接触性病毒,猪场管理好、污染少、不交叉感染之外,猪本身的各种屏障也起着很重要的作用,特别是不让非洲猪瘟病毒达到大量传播的初始条件是很关键的。在病毒感染早期,使用非洲猪瘟抗体,使得病毒数量被抑制,无法转化为能够大量传播复制的攻击型病毒,也是一个很关键的因素。否则,病毒一旦进入疯狂传播飞速侵入体内并大举进入猪血液循环和内脏器官时,就很难再控制了。这时病毒很疯狂破坏单核细胞、巨噬细胞、骨内细胞和内皮细胞等,随着猪各个主系统的崩溃,猪就很难活下来了,即猪被病毒一气凿死,没有反击的机会,更产生不了相应的抗体。相反地,如果病毒被长期抗拒在血液系统之外,只在消化道和呼吸系统表面活动,那猪就有可能产生正常的免疫反应,从而产生良好的抗体,所以早期使用非洲猪瘟抗体达到这一目的,就很成功了。而不是发病或重病后,看是不是能在大群死亡中救过来几头猪的问题了。
10、非洲猪瘟未来的发展趋势和应对策略如何?
答:由于我国落后的集约化生产模式,主是是硬件有,疫控和安全生产上的软件不足,软制度约束没有,比如最基本的自测自检都做不到,在硬件上投钱可以,软件上的人力物力投入高度不足,加上笨拙的疫控手段、稀缺的产业保护机制保险机制以及不好意思说的弄虚作假的应对策略,非洲猪瘟会在我国长期存在,甚至不能杜绝新的毒株“被引进”的怪事再发生,目前毒株的长期存在,肯定会发生一些进化上的适应,非洲猪瘟是一个高度适应外界变化的毒株,其在开放阅读框和非编码区常有核酸变化,特别是lvr等区的串联重复部分。
     
也就是说,非洲猪瘟会在我国长期存在,此起彼伏,在传播过程中会渐渐趋弱,会有一些弱毒株出现。应对措施会出现三种情况相结合,一是“拔牙疗法”:那个猪发病就处理掉,不发病的继续养,在事实上放弃发现即隔离、封锁和疫区全部扑杀的方法,尽管偶尔会在个别小地方报一下疫情;二是使用疫苗,发现天然弱毒株或人工致弱毒株做弱毒苗,给猪免疫减轻疾病的危害程度,当然这样更会使猪群长期携带病毒;三是使用非洲猪瘟抗体,减少病毒在初期对猪的侵入,阻挡病毒对机体的进一步侵害,给猪留下产生免疫的时间,减少强毒株的传播。当然,当非洲猪瘟进一步发展和相对弱化后,其它猪的疾病也都重新进入人们的视线了,比如猪瘟、蓝耳、圆环、伪狂犬、副猪、链球菌等等,很明显,混合感染的猪场死亡率又会重新上扬,控制起来更为复杂困难。下图为某场非洲猪瘟与蓝耳混合感染,800头猪还剩18头,其中所谓康复猪里仍携带这两种病毒,而且量还不少。这种混合感染在今明两年会大量出现,要高度重视。
11、为什么不用猪作抗体?家禽抗非洲猪瘟抗体如何做?
答:在强毒株攻击下,一般只有10%的猪产生抗体,而且抗体还一定高,更危险的是其中一些康复猪即使有抗体但仍然有可能携带病毒,现在也没有我国流行毒株的弱毒株疫苗,所以猪不能作抗体的供体。牛、马等比猪贵,成本也很高,所以只有用家禽来说,我国家禽数量巨大,禽蛋产量巨大,易得,成本还低很多,非洲猪瘟的宿主只有猪,所以非洲猪瘟对家禽不产生毒副作用,禽蛋也不携带病毒。而家禽产生的抗体与猪的抗体非常相近,且交叉度很高,所以利用家禽做是一种简便易行的好方案。
抗体制作大体程序如下:选取健康产蛋家禽,免疫接种五次以上非洲猪瘟疫苗(或毒株),当抗体在卵黄中大于80纳克/毫升时,收取高免禽蛋,提取提纯卵黄抗体,将精制卵黄液体浓缩,置于零下40℃冷冻真空干燥,收取干燥粉,粉碎过筛分装。
12、这是不是国内第一次利用家禽而做的抗体?
答:是的,国内第一个,也是世界上的第一个。相关技术已申请,申请号:201910367734.6

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